细胞状态如何？在传代的黄金时机，细胞应具备70-90%的汇合度，呈现梭形或多边形，且具备透亮特征。如果密度过低，细胞就会“饿肚子”；而过高则会导致细胞变形。我们需要充分准备好37℃预热的胰酶、PBS、新鲜培养基、无菌离心管及酒精灯，确保无任何缺失，并保持无菌环境。确保台面用75%酒精擦拭三遍，并用紫外灯照射30分钟，同时佩戴手套和口罩，绝不要让杂菌趁机滋生。

尊龙凯时的细胞传代步骤如下：

Step 1: 丢弃旧液 轻拍培养瓶让细胞松动，倾斜瓶身，让废液顺势流入废液缸，动作要快速且优雅。

Step 2: PBS洗涤 沿瓶壁缓慢注入PBS，轻轻摇动几次以去除残余血清。倒掉时，要记得留出“眼泪”，以免冲走细胞。

Step 3: 加入胰酶 精准添加预热至37℃的胰酶，确保其均匀覆盖细胞层，之后送回培养箱孵育1-5分钟。当显微镜下看到细胞变圆且边缘卷起时，需立即终止处理，切勿拖延。

Step 4: 加入培养基 用两倍体积的新鲜培养基迅速倒入，以中和胰酶。用移液枪轻轻吹打10-15次，形成“细胞雨”。

Step 5: 离心处理 设置1000rpm，离心5分钟。倒掉上清液，管底沉淀如“细胞小丸子”，可轻弹管壁让沉淀松散。

Step 6: 新家入住仪式 按1:2或1:5的比例，将细胞稀释至新培养瓶，轻轻摇匀并放回37℃、5% CO₂的培养箱。1-2小时后补加新鲜培养基，提升仪式感。

24小时后，检查显微镜下的贴壁情况。如果观察到漂浮的细胞，可能是由于消化过度或接种密度过低造成的“小可怜”。48小时更换新鲜培养基，若颜色变黄，说明细胞已经活跃代谢，需及时补充营养。

在72小时内记录细胞的生长曲线和形态变化。一旦发现异常，需及时排查污染或培养条件。如果细胞聚团不散，可能是由于吹打时力度过大或胰酶量不足，下次需适当增加“轻柔吹打20次”的方法。如果贴壁率低于50%，则需检查培养瓶是否包被，血清批次是否稳定，必要时可使用多聚赖氨酸作为“防滑垫”。

如传代后出现大量死亡，通常是因离心转速过高或时间过长所致，建议将离心速度调整至800rpm，时间控制在3分钟之内，以尝试“温柔离心术”。通过这些细致的操作，我们能够获得更健康的细胞，为生物医学研究和应用提供强有力的支持。

尊龙凯时致力于为客户提供专业的细胞培养和传代服务，帮助您在科研与医疗领域获得更卓越的成果。