**培养条件**：本细胞培养采用气相环境为95%空气和5%二氧化碳，温度设定在37℃，培养基为DMEM添加10%胎牛血清(FBS)及1%青霉素/链霉素(P/S)。A-673细胞系来源于一名15岁女性患者，其为横纹肌肉瘤细胞，能在软琼脂中形成克隆，且能够在接受免疫抑制血清的小鼠中生长为肿瘤。该细胞系具有超过四条的标志性染色体，并且有一个额外的F染色体和两个异常的B染色体。首次传代建议比例为1:2。

**传代过程**：细胞传代应在每两天更换培养基。此外，收到细胞后应及时处理，待细胞状态良好后，将其灌满完全培养液并封好瓶口，以确保细胞运输的安全与稳定。对收到的细胞应先用75%酒精喷洒整个细胞瓶，消毒后置于超净台，进行严格的无菌操作。接下来，将细胞瓶放入37℃、5% CO₂的培养箱中静置3-4小时以稳定细胞状态再进行后续处理。通过显微镜观察细胞生长情况，并对不同倍数下的细胞进行拍照保存（最好分别拍摄40x、100x、200x的照片），前三天的照片是处理售后问题的重要依据，若未提供照片，则默认细胞状态良好。

**细胞培养步骤**： a. **细胞传代**：若细胞汇合度未超过80%，需将瓶装的完全培养液收集至离心管，保留5ml完全培养基，并置于37℃、5% CO₂孵箱中培养；当细胞密度超过80%时，可进行传代培养。传代步骤如下： 1. 弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS清洗细胞1-2次。 2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml至培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，显微镜下观察细胞状态，大部分细胞变圆并开始脱落时，迅速加5ml完全培养基以终止消化。 3. 轻轻吹打细胞，使其完全脱落后吸出，并将悬液转移至15ml离心管中，在1000rpm条件下离心5分钟，弃去上清液后加入1-2ml完全培养基重悬。 4. 将细胞悬液按照1:2的比例分往两个T25培养瓶中，补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入37℃、5% CO₂细胞培养箱中继续培养。

b. **细胞冻存**： 1. 当细胞覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液并用PBS清洗一次； 2. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞状态，待细胞变圆后加入5ml完全培养基终止消化，再轻轻吹打以使细胞脱落，并将悬液转移至15ml离心管中，1000rpm离心5分钟； 3. 弃去上清，沉淀细胞并加入1ml尊龙凯时时生物无血清冻存液混匀后转入冻存管中； 4. 将冻存管置于-80℃冰箱保存，若后续需转入液氮罐中，需先在该冰箱中存放24小时以上。

c. **细胞复苏**： 1. 从液氮中取出冻存管（佩戴防护面具），立即置于37℃水浴中解冻，直至管中无结晶，随后用75%的酒精对冻存管外壁进行消毒； 2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，1000rpm离心5分钟； 3. 弃去上清，并用5ml完全培养基重悬，接种至T25培养瓶，置于37℃、5% CO₂的细胞培养箱中培养； 4. 次日应更换为新鲜完全培养基以继续培养。

**注意事项**：在运输过程中，某些细胞可能因粘附不牢而脱落，这是正常现象。如果有较多细胞脱离，可将所有培养液收集至离心管中，1000rpm离心5分钟後收集上清作过渡培养，接着沉淀并加入1-2ml胰酶，轻轻吹打后消化1-2分钟，再加5ml完全培养基终止反应。再次离心后，弃上清并加入1-2ml完全培养基重悬，最后按照1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，并放入37℃、5% CO₂细胞培养箱中培养。

通过以上规范的细胞培养和管理流程，能够保障细胞的健康生长与繁殖，确保科研工作的顺利进行以及产生可靠的实验结果。