产品信息

产品名称：猪流感通用荧光PCR检测试剂盒（实时荧光PCR法）
英文名称：Swine Influenza Virus Detection Kit (Real-Time PCR Method)
包装规格：50T/盒

预期用途

本试剂盒巧妙利用实时荧光PCR原理，能够定性检测猪流感病毒，对流感及其并发症的诊断具有重要的指导意义，帮助养殖业主和兽医做好疫情防控。

试剂盒组成

该试剂盒内含以下成分：
1. SIV RT-PCR反应液 875 μL × 1管
2. SIV混合酶液 125 μL × 1管
3. SIV阳性对照 40μL × 1管
4. SIV阴性对照 40μL × 1管
5. 使用说明书 1份
注：阴性对照为灭菌纯水，阳性对照为包含猪流感病毒靶基因的质粒。

储存条件及有效期

请将本试剂盒避光存放于-20℃以下，避免反复冻融，并保证有效期为12个月。

适用仪器

可使用ABI系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler和Rotor-Gene系列等多渠道实时荧光定量PCR仪。

样本要求

1. 采集咽喉拭子和鼻拭子：
(1) 咽喉拭子深插入喉头及上颚裂，来回刮3至5次获取分泌液；
(2) 鼻拭子深入鼻腔及周围圈以采集分泌液；
(3) 咽喉拭子和鼻拭子一同放入含10mL生理盐水的离心管中；
(4) 最好使用合成纤维头的拭子，杆子为铝或塑料材质，不推荐使用棉拭子和木杆。

2. 血液或血清样本：通过无菌注射液抽取后置于离心管中待检。

3. 标本采集管应含有蛋白稳定剂的病毒运输液，避免交叉污染。

4. 样本收集后若不能立即检测，需在2–8℃下冷藏保存，长期保存则需冻存于-80℃以下。

检验方法

试剂准备

1. 从冰箱中取出试剂盒，将所需试剂充分解冻并混匀，瞬时离心以去除管壁附着液体。
2. 计算实验所需反应数，依据以下表格配置试剂。
3. 在无菌离心管中加入所需试剂，充分混匀并瞬时离心，然后分装至PCR反应管。

样本准备

使用QIAGEN或Roche公司的RNA提取试剂盒提取RNA，遵循相关操作说明。

加样

将处理好的待测标本RNA各5μL加入PCR反应管中，终体积为25μL，并混匀后瞬时低速离心。阴性和阳性对照也需加入相应试剂，操作同样。

PCR扩增

将PCR反应管放置于实时荧光定量PCR仪，设置相关核酸扩增参数进行PCR扩增，并记录放置顺序。

结果判定

通过荧光信号检测，阳性对照应出现曲线，阴性对照应无Ct值。样本结果判定如下：
1. 阳性：Ct值≤35或有明显指数增长期；
2. 可疑：Ct值在35～38范围内，需重复检测；
3. 阴性：Ct值＞38或无Ct值。

注意事项

1. 实验室需严格遵循相关管理规范；
2. 处理过程应在0-4℃进行，并使用无核酶处理的耗材；
3. 各区域物品应独立使用，避免交叉污染；
4. 吸取反应液时避免产生气泡，检查反应管盖紧；
5. 试剂在使用前需充分解冻和混匀；
6. 确保试剂盒内阳性和阴性对照在使用前存放规范；
7. 避免裸手接触PCR反应管及标记；
8. 使用过的吸头应直接投入废物缸，并对实验台进行定期消毒；
9. 调整仪器参数时根据说明书进行设置，避免混用不同批次试剂。

通过使用尊龙凯时猪流感通用荧光PCR检测试剂盒，您能够为猪流感病毒的预防和控制提供有力支持，保障养殖安全。