### 操作步骤

**1. 准备工作**：准备一支含有5~10mL液体培养基的试管和两块平板。

**2. 安全操作**：在安全柜中打开培养基，用酒精灯烧灼试管顶部，随后迅速滴入无菌水使其破裂，接着用镊子将其敲碎。

**3. 培养基处理**：取0.5mL液体培养基加入冻干管中，充分溶解后再倒回液体试管中并混匀。

**4. 接种平板**：取0.2mL菌悬液加入平板中，涂布均匀，并重复此步骤以获得两个平板。

**5. 培养**：将液体试管和平板放入适宜的培养条件中，待菌种生长后即可使用。

### 培养基制备

**1. 器皿准备**：根据不同情况准备器皿，如三角瓶、试管、培养皿、烧杯和吸管，并确保其清洗、干燥和灭菌。

**2. 溶解培养基配料**：在烧杯中加入适量水，根据培养基配方称取各项材料，包括缓冲化合物、主要元素、微量元素和维生素等，有序加入水中溶解，最后补足水量。

**3. 调整pH值**。

**4. 加入凝固剂**：如琼脂或明胶，将其加入液体培养基中，加热并不断搅拌至完全融解，补足蒸发的水分。

**5. 过滤和分装**。

**6. 包扎和标记**。

**7. 灭菌**。

**8. 无菌检查**。

### 接种方法

**1. 斜面接种**：根据菌种特性选择不同接种方法，如点接、中央划线等。

**2. 穿刺接种**：使用种针从原菌种斜面挑取少量菌苔，插入柱状培养基中心并小心抽出。

**3. 液体接种**：取少量固体斜面菌种或用无菌工具吸取原菌液接种于新鲜液体培养基中。

### 培养

将接种后的培养基放入培养箱，保持适宜条件，直至细胞稳定或获得成熟孢子。

### 保藏方法

**1. 保藏温度和时间**：一般在4℃－6℃保存，每3－6个月进行移植，某些菌种需要更频繁的移植。

**2. 保藏湿度**：保持相对湿度在50%－70%。可通过毛发湿度计或干湿球湿度计测量。

### 移植培养

将培养物转接至另一新鲜培养基，并在适宜条件下继续培养。

### 复壮菌种

如需复壮退化的菌种，应将其引入原生活环境，促其生长和繁殖，通过纯种分离和在宿主体内生长等方法进行复壮。

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