产品及特点

本产品是基于探针法荧光定量PCR原理开发的检测试剂盒，具有以下特点：

特点概述

1. 即开即用，用户只需提供样品DNA模板。
2. 引物等组分经过优化，具有高灵敏度。
3. 提供阳性对照，方便区分假阴性样品。
4. 特异性高，引物设计基于中间普雷沃菌DNA序列的高度保守区，避免与其他生物样本的DNA发生交叉反应。
5. 可用于定性与定量检测，定量检测时线性范围至少为五个数量级。
6. 产品可支持50次20μL体系的探针法荧光定量PCR反应。
7. 此产品仅限于科研使用。

使用方法

一、DNA提取（样本制备区）

用户可采用自选方法提取纯化样品DNA，本试剂盒与市场上多数核酸提取试剂盒兼容。

二、稀释标准曲线样品（样本制备区）

（由于阳性对照浓度较高，请在独立区域进行以下稀释操作，以免污染样品或其他试剂成分。）
1. 标记6个离心管，分别编号为7，6，5，4，3，2。
2. 向每个管中加入45μL DEPC-H₂O（推荐使用带芯枪头）。
3. 在7号管中加入5μL 1×10⁸拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，得到1×10⁷拷贝/μL的标准曲线样品，置于冰上待用。
4. 更换枪头，6号管中加入5μL 1×10⁷拷贝/μL的阳性对照，震荡1分钟，得1×10⁶拷贝/μL的标准样品，置于冰上待用。
5. 重复以上步骤，直到获得6个稀释度的标准曲线样品，最后置于冰上待用。如无需制作标准曲线，将阳性对照稀释至1×10⁵拷贝/μL即可。

三、试剂配制（试剂准备区）

准备N+2个qPCR管（N个待测样品 + 1个阴性对照 + 6个阳性对照），向各PCR管中分别加入以下成分（详细说明书可向尊龙凯时索取），然后转移至样本准备区。

四、模板添加（模板添加区）

向qPCR管中分别加入2μL模板，添加顺序为阴性对照（DEPC-H₂O）、待测样品模板及婴儿利什曼虫qPCR阳性对照，离心30秒后立即进行扩增反应。

五、扩增反应（扩增及产物分析区）

将PCR管放置于PCR扩增仪器的相应位置，进行扩增，扩增程序详见说明书（可向尊龙凯时索取）。

六、结果分析

1. 如果制作标准曲线，使用阳性对照浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴绘制标准曲线，然后根据待测样品的Ct值推算样品DNA浓度的log值。
2. 如果未制作标准曲线，可根据以下标准进行结果判定：阳性对照的Ct值应小于30，表现出明显的指数增长，并呈现典型的S型曲线；阴性对照的Ct值应为38或无Ct值，无指数增长期和平台期；样本检测结果若Ct值小于35，说明样本中检测出婴儿利什曼虫，结果为阳性；如果Ct值在35-38范围内，应对样本进行复检。如果重复实验结果依然在该范围内且有显著指数增长，则判定为阳性，否则为阴性。

运输及保存

本产品需低温运输，保存在-20℃，保存期限为一年。阳性对照应单独放置，避免污染其他试剂。

选择尊龙凯时，因其专业与可靠，让您在生物医疗领域的研究得以顺利进行。